材料与试剂
5ml流式管、试管架（5ml）、15ml离心管、40μm过滤筛、小鼠(根据实验需求安排)、1ml带针注射器、目钢网或尼龙网、10cm培养皿、烧杯、镊子（2把）、眼科手术剪刀，红细胞裂解液。
方法与步骤研磨法
1.颈部脱位处死小鼠或者用CO2对小鼠实施安乐死颈部脱位。
2.将小鼠在75%酒精中浸泡10min，解剖小鼠，取出脾脏，去除脾脏周围的其他组织。
3.将脾脏放在培养皿中目的金属网或尼龙网上，用注射器内心研磨，研磨过程中不停加入组织解离液。
4.收集脾细胞悬液放入离心管中，4°C下xg离心细胞5分钟。
5.弃上清，将细胞悬浮于2ml的2%FBS的DMEM中。
此时细胞悬浮液中含有各种免疫细胞与红细胞
6.计数
7.如果红细胞影响实验结果，则需要加入1ml1xACK红细胞裂解液，轻轻吹打混匀，室温裂解1~2min，4°C下g离心细胞5分钟，含2%FBS的DMEM重悬细胞。重悬细胞并计数。
溶液配方
组织分离液：RPMI-、2%的FBS、25mMHEPES(pH7.4)、ug/mlDNaseI(来自10mg/ml原液)
1xACK红细胞裂解缓冲液：15.5mM氯化铵(NH4Cl)、1mM碳酸氢钾(KHCO3)、0.01mM乙二胺四乙酸(EDTA)pH=7.2~7.40.22μm无菌滤膜过滤。
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